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經常使用儲存液的配制
新竹博美生物科技有限責任公司 / 2015-01-27

經常使用儲存液的配制

  1.30%丙烯酰胺溶液
  【配制辦法】
  將29g丙烯酰胺和1g N,N’-亞甲雙丙烯酰胺溶于整體積爲60ml的水中。加熱至37℃消融之,補加水至終體積爲100ml。用Nalgene濾器(0.45μm孔徑)過濾除菌,查證該溶液的pH值應不大于7.0,置棕色瓶中保留于室溫。
  【留意】
  丙烯酰胺具有很強的神經毒性並可以經由過程皮膚接收,其感化具積累性。稱量丙烯酰胺和亞甲雙丙烯酰胺時應戴手套和面具。可以為聚丙烯酰胺無毒,但也應謹嚴操作,由於它還能夠會含有大批未聚合資料。一些質量稍差的丙烯酰胺和雙丙烯酰胺平日含有一些金屬離子,在丙烯酰胺儲存液中參加大約0.2體積的單床混雜樹脂(MB-1Mallinckrodt),攪拌留宿,然後用
Whatman 1號濾紙過濾以純化之。在儲存時代,丙烯酰胺和雙丙烯酰胺會遲緩轉化成丙烯酰和雙丙烯酸。

  2.40%丙烯酰胺
  【配制辦法】
  把380g丙烯酰胺(DNA測序級)和20g N,N’-亞甲雙丙烯酰胺溶于整體積爲600ml的蒸餾水中。持續按上述配制30%丙烯酰胺溶液的辦法處置,但加熱消融後應以蒸餾水補足至終體積爲1L。
  【留意】
  見上述配制30%丙烯酰胺的解釋,40%丙烯酰胺溶液用于DNA序列測定。

  3.放線菌素D溶液
  【配制辦法】
  把20mg放線菌素D消融于4ml 100%乙醇中,1:10濃縮儲存液,用100%乙醇作空白對比讀取OD440值。放線菌素D(份子量爲1255)純品在水溶液中的摩爾消化系數爲21,900,故而1mg/ml的放線菌素D溶液在440nm處的吸光值爲0.182,放線菌素D的儲存液應放在包有箔片的試管中,保留于-20℃。
  【留意】
  放線菌素D是致畸劑和致癌劑,配制該溶液時必需戴手套並在透風櫥內操作,而不克不及在開放在試驗桌面長進行,嚴防吸入藥粉或讓其接觸到眼睛或皮膚。藥廠供給的作醫治用處的放線菌素D成品常含有糖或鹽等添加劑。只需經由過程丈量儲存液在440nm波優點的光接收肯定放線菌素D的濃度,這類成品即可用于克制本身引誘感化。

4.X-gal溶液
【配制辦法】
X-gal爲5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D半乳糖苷。用二基甲酰胺消融X-gal配制成的20mg/ml的儲存液。保留于一玻璃管或聚丙烯管中,裝有X-gal溶液的試管須用鋁箔封裹以防因受光照而被損壞,並應儲存于-20℃。X-gal溶液不必過濾除菌。

5.IPTG溶液
【配制辦法】
IPTG爲異丙基硫代-β-D-半乳糖苷(份子量爲238.3),在8ml蒸餾水中消融2g IPTG後,用蒸餾水定容至10ml,用0.22μm濾器過濾除菌,分裝成1ml小份儲存于-20℃。

6.10mmol/L苯***************(PMSF)溶液
【配制辦法】
用異丙醇消融PMSF成1.74mg/ml(10mmol/L),分裝成小份儲存于-20℃。若有需要可配成濃度高達17.4mg/ml的儲存液(100mmol/L)。
【留意】
PMSF嚴重傷害呼吸道粘膜、眼睛及皮膚,吸入、吞進或經由過程皮膚接收後有致命風險。一旦眼睛或皮膚接觸了PMSF,應立刻用大批水沖刷之。凡被PMSF凈化的衣物應予拋棄。
PMSF在水溶液中不穩固。應在應用前從儲存液中現用現加于裂解緩沖液中。PMSF在水溶液中的活性損失速度隨pH值的降低而加速,且25℃的掉活速度高于4℃。pH值爲8.0時,20μmmol/l PMSF水溶液的半壽期大約爲85min,這註解將PMSF溶液調理爲堿性(pH>8.6)並在室溫放置數小時後,可平安地予以拋棄。

7.溴化乙錠(10mg/ml溶液)
  【配制辦法】
  在100ml水中參加1g溴化乙錠,磁力攪拌數小時以確保其完整消融,然後用鋁箔包裹容器或轉移至棕色瓶中,保留于室溫。
  【留意】
  當心:溴化乙錠是強誘變劑並有中度毒性,應用含有這類染料的溶液時務必戴上手套,稱量染料時要戴面罩。

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